ABSTRACT A few studies have carried out the taxonomic and molecular characterization of sylvatic mosquito species in Latin America, where some species have been incriminated as vectors for arboviruses and parasites transmission. The present study reports the molecular characterization of mosquito species in the Sierra Nevada de Santa Marta, a natural ecosystem in the Northern coast of Colombia. Manual capture methods were used to collect mosquitoes, and the specimens were identified via classical taxonomy. The COI marker was used for species confirmation, and phylogenetic analysis was performed using the neighbor-joining method, with the Kimura-2-Parameters model. Aedes serratus , Psorophora ferox , Johnbelkinia ulopus , Sabethes chloropterus , Sabethes cyaneus , Wyeomyia aporonoma , Wyeomyia pseudopecten , Wyeomyia ulocoma and Wyeomyia luteoventralis were identified. We assessed the genetic variability of mosquitoes in this area and phylogenetic reconstructions allowed the identification at the species level. Classical and molecular taxonomy demonstrated to be useful and complementary when morphological characteristics are not well preserved, or the taxonomic group is not represented in public molecular databases.

ABSTRACT Hepatozoon canis are protozoa transmitted to dogs mainly by ticks of the Rhipicephalus sanguineus species. In Colombia, H. canis has been detected; however, only one study using the PCR technique is available detecting this hemoparasite. This study reports a frequency of infection of 8.6% (30/350 samples). H. canis was detected in blood samples from domestic dogs in the city of Cucuta (Colombia), by real-time PCR using hybridization probes with duplex detection and internal control of GADPH amplification, using primers and probes designed in this study.

RESUMEN Hepatozoon canis son protozoarios transmitidos a perros principalmente por garra- patas de la especie Rhipicephalus sanguineus. En Colombia se ha detectado H. canis; sin embargo, solo se dispone de un estudio empleando la técnica de PCR para la detec- ción de este hemoparásito. En este trabajo se reporta una frecuencia de infección de 8.6% (30/350 muestras). Se detectó la presencia de de H. canis en muestras de sangre de caninos domésticos de la ciudad de Cúcuta (Colombia), mediante PCR en tiempo real, empleando la tecnología de sondas de hibridación con detección dúplex y control inter- no de amplificación GADPH, utilizando cebadores y sondas diseñados en el presente estudio.

La entomología forense es una disciplina que utiliza insectos para obtener información útil en la determinación del intervalo postmortem (IPM). Las moscas de la familia Calliphoridae son muy utilizadas en entomología forense, sin embargo, su identificación a nivel de especie puede dificultarse cuando el individuo se encuentra incompleto o en estadio inmaduro. En el presente trabajo, se evaluó el potencial de la región ITS2 del genoma nuclear para la identificación de especies de Calliphoridae en Colombia utilizando tres aproximaciones: comparando distancias genéticas utilizando la metodología de códigos de barra, haciendo una reconstrucción filogenética, y con enzimas de restricción (PCR-RFLPs). Se secuenciaron un total de 520 pb en 44 individuos pertenecientes a 16 especies. Se calcularon los valores de distancia intraespecífica e interespecíficas utilizando el modelo K2P. Los valores de distancia intraespecífica oscilaron entre 0 y 0,252 %, mientras que las distancias interespecíficas fluctuaron entre 3,6 y 18,9 %, evidenciándose que esta técnica puede ser utilizada como código de barras genético en la identificación de especies de la familia Calliphoridae. Tanto en los análisis de Neighbour-Joining como en los análisis bayesianos el 90 % de los géneros presentan una monofilia sustentada en probabilidad posterior de 0,89 a 1. En todos los casos la especie Blepharicnema splendens agrupa con el género Lucilia. Con base en las secuencias obtenidas se utilizó la aplicación NEBCutter para identificar cuatro enzimas de restricción las cuales se probaron en el laboratorio y se comprobó su utilidad para la identificación rápida de especies de Calliphoridae en Colombia.

Forensic entomology is a discipline that uses insects to obtain useful information for the determination of the postmortem interval (PMI). Flies of the family Calliphoridae are extensively used for this purpose, however, the identification of these flies can be difficult when the individual is not an adult or when it is incomplete. In the present work, we tested the utility of the ITS2 region of the nuclear genome for the identification of Calliphoridae species in Colombia using three approaches: comparing genetic distances using the barcoding methodology, with a phylogenetic reconstruction, and with PCR-RFLPs. We sequenced 520 bp in 44 individuals belonging to 16 species of califorids. Intraspecific and interspecific distance values were calculated using the K2P model. The intraspecific distance values ranged between 0 and 0.252 %, while the interspecific distance values ranged between 3.6 and 18.9 %, indicating that this gene can be used as a genetic barcode for the identification of species of the Calliphoridae family. Both the Neighbour-Joining and Bayesian analyses recovered 90 % of the genera as monophyletic, with pp values between 0.89 and 1. Blepharicnema splendens was always recovered within the Lucilia genera. Based on the obtained sequences we used the NEBCutter application to identify four restriction enzymes that cut in a differential way and generated useful patterns for the identification of the species. The enzymes were successfully tested and confirmed the utility of this technique as a fast way to identify species of Calliphoridae in Colombia.

Reconociendo la importancia de la correcta identificación de los insectos asociados a los cuerpos cadavéricos para estimar el intervalo postmortem de una forma efectiva; teniendo en cuenta la incidencia de las moscas de la familia Calliphoridae en cadáveres y la dificultad existente para su determinación taxonómica de los estadios inmaduros, se evaluó la utilidad de la secuencia del gen mitocondrial COI como herramienta de diagnóstico molecular para la identificación de califóridos de importancia forense en Colombia. Se utilizaron secuencias de muestras colectadas en Colombia y otras tomadas de Genbank. Se realizaron análisis de divergencia de nucleótidos y análisis de "neighbour-joining", con base en las distancias genéticas calculadas con el modelo K2P. Se realizaron análisis bayesianos y se desarrolló una representación gráfica de la variación del fragmento de COI para cada especie. Se obtuvieron fragmentos de 545 pb; los valores de distancia intra-especifica, cuando se incluyen todas las especies secuenciadas, oscilaron entre 0% y 2,904% y los de distancia inter-especifica entre 0,188% y 18,07%, observándose un solapamiento de distancias, ocasionado principalmente por la inclusión de especies con solo una secuencia. Al excluir las especies con una sola secuencia y tratar a L. eximia como dos subgrupos, se logró observar un gap de distancias de 2,292%, el cual es un valor óptimo para la validación de esta técnica. Se observaron monofilias recíprocamente específicas en la mayoría de las especies, concluyendo que el gen COI es un buen marcador para delinear especies de la familia Calliphoridae en Colombia.

Recognizing the importance of the correct identification of insects associated with deceased bodies for an effective estimation of time of death, and taking into account the incidence of flies of the family Calliphoridae in corpses and the difficulty of their taxonomic determination, we evaluated the usefulness of COI mitochondrial gene sequences as a molecular diagnostic tool for identifying forensically important calliphorids in Colombia. Sequences obtained from samples collected in different regions of Colombia and other sequences taken from Genbank were used. Based on the genetic distances calculated using the K2P model, nucleotide divergence and neighbour-joining analyses were performed. Bayesian analyses were also developed and a graphical representation of the variation of the COI fragments for each species. A total 545 pb fragments were obtained; the values of intraspecific distance when all sequenced were included, ranged between 0% and 2.904% and the interspecific distance ranged between 0.188% and 18.07%, with an overlapping distance, caused mostly by the inclusion of species with only one sequence. When we excluded species with a single sequence and L. eximia was analyzed as two subgroups, a distance gap of2.292% was obtained, which is an optimal value for the validation of this technique. Reciprocal monophyly was observed in most species. We conclude that the COI gene is a good marker for delineating species of the family Calliphoridae in Colombia.